Generación de embriones interespecie clonados a partir de fibroblastos de piel de bovino - Aguilar Chávez, Iván (Universidad Autónoma Metropolitana, 2023)
El uso de células somáticas (fibroblastos) provenientes de piel, constituye un precedente sumamente importante para la obtención de cultivos celulares con fines reproductivos, de conservación y preservación de material genético proveniente de especies amenazadas, extintas o en peligro de extinción, especímenes cuyo potencial genético es superior al resto de la población promedio a la que pertenecen, apoyados de tecnologías de reproducción animal asistida como el la transferencia nuclear de células somáticas (TNCS). En el presente trabajo se utilizaron tres métodos de deriva celular (enzimático (E), mecánico (M) y mecánico-enzimático o mixto (M-E) para obtener fibroblastos de piel de bovinos adultos post mortem (tipo criollo) y vivos para producción de carne hembras y machos (razas Angus, Simbrah, Simmental y Tuli), y de bovino joven para producción de leche (Holstein). Como variables medibles se consideró el crecimiento y número de células obtenidas en cada uno de los pasajes celulares, siendo el método E superior (p≥0.05) para los cultivos primarios de deriva celular. Este método mostró un número de células en crecimiento (± 50%) para el primer pasaje, reduciéndose hacia el segundo pasaje (± 15%) y siendo aún menor en el último pasaje celular. El tiempo estimado de crecimiento en días de las colonias celulares fue en promedio de 10±3.1 (M-E), 11±3.5 (E), 12±3.7 (M). Se demostró la eficiencia de los métodos empleados para obtener células de piel de oreja de bovinos productivos y llevarlas a los pasajes celulares necesarios para su uso como carioplastos en la transferencia nuclear de células somáticas interespecie (TNCSI). También se demostró la capacidad de crecimiento postcongelación de estas células, lo cual garantiza su almacenamiento en bancos de germoplasma. Respecto a la TNCSI, se utilizaron ovocitos de ovino doméstico como citoplastos receptores de los carioplastos de bovino hembra adulta raza Simbrah de la UANL. El máximo desarrollo alcanzado por los embriones clones de bovino Simbrah así reconstruidos, fue la etapa de mórula (16 células) con una tasa de eficiencia del 46%. Se seleccionó la hembra raza Simbrah porque fue el ejemplar de la que se obtuvieron las cuentas celulares más altas (±10%), en comparación con las razas Tuli, Simmental, Angus y Holstein, respectivamente, y porque fue campeona mundial en el 2020. Con lo cual se demostró la utilidad de esas células para la TNCSI. Estos resultados dan un importante precedente para llevar a cabo la TNCS utilizando el método manual (Handmade cloning o HMC), resta continuar evaluando otras fuentes de ovocitos como receptores de núcleo; The use of somatic cells (fibroblasts) from the skin constitutes an extremely important precedent for obtaining cell cultures for the purposes of reproduction, conservation and demonstrated genetic material of threatened, extinct or endangered species, specimens whose genetic potential is superior. To the rest of the average population. To which they belong, supported by assisted animal reproduction technologies such as somatic cell nuclear transfer (SCNT). In the present work, three methods of cell drift (enzymatic (E), mechanical (M) and mechanical-enzymatic or mixed (ME)) were used to obtain live postmortem adult bovine skin fibroblasts (Creole type) for production. Of meat Females and males (Angus, Simbrah, Simmental and Tuli breeds), and young cattle for milk production (Holstein). As measurable variables, the growth and number of cells obtained in each of the cell passages were observed, the E method being higher (p≥0.05) for the primary cultures of cell drift. This method shows a growing number of cells (±50%) for the first passage, decreasing towards the second passage (±15%) and being even lower in the last passage. cell passage. The estimated growth time in days of the cell colonies was on average 10±3.1 (ME), 11±3.5 (E), 12±3.7 (M). The efficiency of the methods used to obtain cells was demonstrated, of ear skin from productive bovines and extract the p-cell handles required for use as caryoplasts in interspecies somatic cell nuclear transfer (ISCNT). The post-freezing growth capacity of these cells was also increased, which guarantees their storage in germplasm banks. Regarding the ISCNT, oocytes from domestic sheep were used as receptor cytoplasts for the caryoplasts of adult female Simbrah bovines from the UANL. The maximum development reached by the cloned Simbrah bovine embryos thus reconstructed was the morula stage (16 cells) with an efficiency of 46%. The female Simbrah breed was selected for being the specimen from which the highest cell counts (±10%) will be acquired, compared to the Tuli, Simmental, Angus and Holstein breeds, respectively, and for being world champion in 2020. With which the utility of these cells will be exploited for ISCNT. These results set an important precedent for performing the SCNT by the manual method (Handmade cloning or HMC), it remains to continue evaluating other sources of oocytes such as nucleus recipients.