Utilización del autotransportador MisL como vector de epítopos heterólogos en Salmonella enterica Público Deposited
El quinto sistema de secreción de proteínas en bacterias gram negativas, también llamado de "autotransportadores", está constituido por proteínas que presentan tres dominios funcionales: la secuencia señal, el dominio alfa o amino terminal y el dominio beta o carboxilo terminal. Este último dominio es el que tiene la función de autotransportador, ya que transloca el dominio alfa al exterior mediante la formación de un poro en la membrana externa de manera semejante a como se ensamblan las porinas de bacterias gram-negativas. Esta propiedad hace que este sistema de secreción sea considerado como el más sencillo para la exportación de proteínas en bact.erias gram-negativas. Se ha propuesto a las proteínas autotransportadoras para translocar péptidos y proteínas heterólogas hacia la membrana externa o al medio extracelular, lo cual se ha demostrado con éxito en E. coli con el dominio p de 1:s proteína AIDA (de EPEC) y de la proteasa de IgA (de Neisseria gonorrheae). En el presente trabajo demostramos el uso de la proteína MisL de Salmonella typhimurium (propuesta como el primer autotransportador del género Salmonella) como un buen sistema para expresar epítopos inmunogénicos en la superficie de acarreadores vivos. Por homología de la secuencia aminoacídica del dominio carboxiterminal de MisL con AIDA y con apoyo del modelo topológico hipotktico de AIDA previamente publicado se predijo la región carboxilo-terminal de MisL necesaria para la formación del poro. La secuencia carboxilo-terminal propuesta como el dominio beta fue fusionada en su extremo amino terminall con 4 repetidos de los aminoácidos NANP de la proteína CSP de P. fakiparum, que constituyen el epítopo inmunodominante de células B y con la secuencia señal de la subunidad B de la toxina termolábil de E. coli EPEC (LTBsp). La expresión de esta proteína de fusión fue controlada por el promotor inducible in vivo pnir. Los resultados obtenidos demuestran que efectivamente MisL es un autotran,sportador y que puede ser empleado para expresar en la superficie de bacterias gram-negativas epítopos inmunogénicos y generar una respuesta inmune humoral contra ellos, dando lugar así a la creación de nuevos sistemas vacunales, de secreción de proteínas de interés biotecnológico y de ensayos de unión ligando-receptor, ya que la proteína acarreadora no altera la conformación de los péptidos dado que 10s anticuerpos generados contra éstos reconocieron también la proteína CSP nativa en la superfice de esporozoitos de P. falciparum.
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