Obtención y caracterización de la enzima lacasa a partir de Agaricus bisporus Público Deposited
La producción de hongos comestibles requiere un desarrollo biotecnológico para bioconvertir, rentablemente y a gran escala, residuos lignocelulósicos agrícolas y forestales en alimento de consumo humano directo. Anualmente se producen 2,000,000 de toneladas de hongos comestibles en el mundo, cuyo valor económico supera los 5 000 millones de dólares (Martínez y col., 1993); la composta comercial utilizada como substrato sólido para el crecimiento de hongos es una fuente de bajo costo la cual cuando es inoculada con micelio de Agaricus bisporus, es una fuente de muchas enzimas extracelulares del tipo oxidativas e hidrolíticas, siendo la más abundante la llamada lacasa (Matcham y Wood, 1992). En este trabajo se plantea la identificación de una posible fuente industrial de lacasa a partir de los materiales presentes en la industria del hongo comestible, obteniéndose una diversificación del uso de subproductos de los hongos comestibles. El extracto crudo de lacasa puede aplicarse en la biorremediación en la oxidación selectiva de pigmentos fenólicos p. ej.: desteñido de telas con azul índigo. La lacasa producida por A. bisporus fue purificada 15 veces, con un porcentaje de recuperación del 4.4% después de 3 etapas de purificación. El tiempo de purificación enzimática total requerido fue de 3 horas. El punto isoeléctrico (pi), de la lacasa producida por A. bisporus, fue de 4.2. El peso molecular de la enzima fue de 100 kDa aproximadamente. La temperatura óptima de actividad enzimática fue de 30° C y su energía de inactivación de 15. 17 Kcal/mol. El pH óptimo fue de 6.5 utilizando un amortiguador de fosfatos O.OIM. El fue de 717.4 µM y la V max de 184. 5 µmol/min x ml, con una concentración de proteína de 0.016 mg/mL la cual correspondió a una actividad específica de 545mmol/mg minuto La metodología de purificación de este tipo de enzimas podrá ser útil para futuros estudios que permitan caracterizar y clonar los genes correspondientes para su eventual producción mediante ingeniería genética, usando organismos transformados como los del género Aspergillus que son mohos de más rápido crecimiento que los hongos productores de lacasas.
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