Estudio in vitro e in vivo de cinco plantas utilizadas en México para el tratamiento de alteraciones proliferativas de la médula Ósea - Velasco Lezama, Rodolfo (Universidad Autónoma Metropolitana, 2003)
En la medicina tradicional mexicana las especies vegetales So/anum torvum, Smilax aristolochiafolia, Plantago major, Anemopsis califomica y Amphypterigyum adstringens se utilizan empíricamente como agentes antitumorales, antimicrobianos y antianémicos. Para el presente trabajo se obtuvieron los extractos de las plantas con agua, metano!, cloroformo y hexano mediante calentamiento a temperatura de reflujo durante 3 horas. Alícuotas de 0.1 mi de las diluciones de 0.4, 0.2, 0.1 y O.OS g/mL de lós extractos se adicionaron a cultivos de células de médula ósea y de bazo de ratones macho de la cepa CD1 de 8 a 12 semanas de edad. Los cultivos se incubaron a 37ºC durante 72 horas. El número de células fue determinado en hemocitómetro. Las dosis de 0.4, 0.2 y O.OS g/mL del extracto acuoso de cada planta y el extracto metanólico de S. aristolochiaefolia fueron administrados oralmente a sendos grupos de 10 ratones (una dosis diaria durante tres días consecutivos), se utilizó un grupo control que reci_bió solución salina fisiológica. Después de 48 horas se contaron los eritrocitos, leucocitos, plaquetas y células nucleadas de la médula ósea femoral. Simultáneamente, se estableció un modelo para la inducción experimental de anemia aplástica en ratones mediante la inyección de benceno por vía subcutánea. Se emplearon ratones CD1 de 8 a 12 semanas de edad distribuidos en los grupos A1, 81, C1 y 01, A2, 82, C2 y 02 con 15 ratones cada uno. A los grupos A 1, 81 y C1 se les inyectó benceno (2 ml/kg) diluido VN)/ con aceite de maíz. El benceno se administró diariamente de lunes a viernes (primer esquema de inducción) hasta completar 1 O, 15 y 20 dosis, respectivamente. A los ratones de los grupos A2, 82 y C2 se les inyectó el benceno tres días alternados con dos de descanso a la semana (segundo esquema de inducción) hasta llegar a las 10, 15 y 20 dosis, respectiva-mente. Los grupos D1 y D2 fueron testigos y recibieron por la misma vía y calendario el aceite de maíz. Dos días después de la última inoculación, los ratones se sangraron y sacrificaron y se les realizó una citometría hemática. También se analizó la celularidad de la médula ósea y la histopatología del bazo. Todos los extractos acuosos estimularon la proliferación de células de médula ósea y del bazo incrementando la concentración celular de 1.43 a 2.9 y de 1.6 a 8.6 veces, respectivamente (p<0.001). Los extractos metanólicos de P. mayor, S. torvum y S. aristolochiaefolia presentaron actividad hematopoyética similar o igual a sus correspondientes extractos acuosos. Los extractos metanólicos de A. califomica y de A. adstringens no estimularon la proliferación de células de la médula ósea, sin embargo presentaron la mayor actividad hematopoyética en cultivo de células de bazo, incrementando 4.8 y 8.8 veces la cuenta de células, respectivamente. La concentración de 0.2 g/mL de los extractos clorofórmico y hexánico de S. torvum incrementó 3.0 y 4.0 veces la concentración de células de médula ósea, respectivamente. En los ensayos in vivo sólo se observó incremento en el número leucocitos con las dosis de 0.4, 0.2 y 0.05 g/mL de S. torvum y 0.2 g/mL de A. adstringens (p<0.005) Por otra parte, 70% de los ratones tratados con 0.05 g/mL del extracto acuoso de A. califomica murieron antes de concluir el experimento, los ratones sobrevivientes presentaron incremento en el número de plaquetas (p<0.05) y reducción aguda en la cuenta de células nucleadas de la médula ósea (p<0.001) En la inducción de anemia a plástica, los ratones C1 y C2 presentaron baja en la concentración de eritrocitos y hemoglobina. Las cuentas de leucocitos y de células de la médula ósea disminuyeron 80% y 50% (C1) y 62% y 48% (C2), respectivamente y sólo el grupo C2 presentó trombocitopenia severa. Ambos esquemas de tratamiento con benceno causaron anemia a plástica. Sin embargo, en los ratones tratados mediante el esquema uno, la anemia fue enmascarada por la toxicidad del bazo (grupo 18). El esquema 2 permitió la sobrevivencia de los ratones y no produjo efectos secundarios que enmascaran el cuadro de la AA inducida.; In Mexican traditional medica! practice, the plant species Solanum torvum, Smilax aristolochiaefolia, Plantago major, Anemopsis californica and Amphypterigyum adstringens are empirically used as antitumoral, antimicrobial and antianemic agents. We obtained water, methanol, chlorofarm and hexane extracts of these plants by heating far 3 hours at reflux temperature. Dilutions of 0.4, 0.2, 0.1 and O.OS g/ml were prepared and 0.1 mi added to bone marrow and spleen cells of CD1 strain male mice aged 8 to 12 weeks. Cell cultures were incubated at 37°C far 72 hours, and cells were counted using an hemocytometer. Aqueous extracts of each plant and methanolic extracts of S. aristolochiaefolia were administered orally at a single daily dosage of 0.4, 0.2 or O.OS g/ml to groups of 1 O mice. A control group received saline solution only. Forty eight hours after the last dose was administered, erythrocytes, leukocytes, platelets and nucleated bone marrow cells (femoral) were counted. Simultaneously, an experimental model to induce aplastic anemia (AA) by benzene injection was established in CD1 mice aged 8 to 12 weeks. Groups of 15 mice each were subjected two different AA induction schemes: 1) First scheme: 2 ml/kg benzene diluted in com oíl (VN) was administered subcutaneously daily from Monday to Friday until a total of 1 O (Group A 1 ), 15 (Group B 1) and 20 doses (Group C1) were completed; 2) Second induction scheme: 2 mg/kg benzene were administered by subcutaneous injection 3 days a week (Mo-Wed-Fri) until a total of 1O (Group A2), 15 (Group B2) and 20 doses (Group C2) were completed. Control groups (D1 and D2) received only corn oil using the route and schedule described for induction schemes 1 and 2, respectively. Two days after the last benzene dose was administered, the mice were bled and sacrificed. Blood cell counts, bone marrow cellularity and spleen histopathology studies were performed. AII aqueous extracts stimulated bone marrow and spleen cell proliferation, increasing cell concentrations from 1.43 to 2.9 and from 1.6 to 8.6 fold, respectively (p<0.001) P. majar, S. torvum and S. aristolochiaefo/ia methanol extracts showed hematopoietic activitiy similar to that of their corresponding aqueous extracts. A. californica and A. adstringens methanol extracts did not stimulate bone marrow cell proliferation, but showed greater hematopoietic activity in spleen cells cultures, increasing cell counts 4.8 and 8.8 fold, respectively. Chloroform and hexane extracts of S. torvum (0.2 g/ml) increased the concentration of bone marrow cells 3.0 and 4.0 fold, respectively. In vivo assays showed that only WBC counts increased with 0.4, 0.2 and 0.05 g/ml S. torvum and 0.2 g/ml. A. adstringens treatments (p<0.05). Moreover, 70% of the mice treated with 0.05 g/ml A. californica aqueous extract died befare the experiment concluded, and surviving mice showed increased platelet counts (p<0.05) and an acute decrease of nucleated bone marrow cell counts (p<0.001) In the AA-induction models, groups C1 and C2 showed lower erythrocyte and hemoglobin concentrations. C1 mice showed 80% and 50% decreases of leukocyte and bone marrow cell counts, respectively, while C2 mice showed 62% and 48% decreases, respectively. Severe thrombocytopenia was observed in group C2. Both benzene treatment schemes induced AA. However, spleen toxicity masked the anemia in mice treated with scheme 1 (group 1 B). Scheme 2 allowed mice survival, and caused no side effects.