Evaluación de la calidad de embriones clones de Ovis canadensis mexicana - Hernández Martínez, Sarahí (Universidad Autónoma Metropolitana, 2017)
Las biotecnologías reproductivas han generado avances en la producción de embriones in vitro, sin embargo, aún no se han logrado las eficiencias observadas en el proceso in vivo; para su éxito, la evaluación y selección de los embriones han sido consideradas. Éstas consisten en identificar los embriones de mejor calidad con altas probabilidades de iniciar una gestación y una cría nacida viva. En este estudio se evaluaron los embriones clones de un borrego cimarrón macho adulto (Ovis canadensis mexicana), implementando los criterios internacionales de evaluación morfológica embrionaria. Los criterios evaluados fueron: tasa de segmentación, donde el grupo experimental (embriones clones de O. c. mexicana) no difirió del grupo control (embriones partenogenéticos de Ovis aries) (P>0.05) y los datos fueron similares a los reportados en la literatura. La tasa de formación de blastocistos fue de 14.2% para embriones clones y 19.6% para embriones partenogenéticos (P>0.05). La fragmentación embrionaria tipo IV, fue superior y significativa en el grupo experimental (P<0.05). Mediante la evaluación del estadio embrionario se demostró que, a las 24 horas de cultivo, se pueden identificar aquellos embriones que realizaron al menos una división celular y fue posible determinar los embriones fragmentados. A las 96 horas se detectó la mayor proporción de mórulas (clones 33% y partenogenéticos 35%). A las 192 horas se observaron los estadios finales del desarrollo embrionario: no segmentados, fragmentados, blastocistos y la tasa de bloqueo del desarrollo. Otro criterio evaluado fue la morfología, la cual tiene relación inversa con el tiempo de cultivo in vitro, ya que la calidad morfológica embrionaria disminuye a través de este. Por lo que se determinó que las 96 horas de cultivo, es el mejor tiempo para predecir la calidad final de un embrión. La tinción de mórulas indicó que la «calidad 1» («Excelente») posee el porcentaje más elevado de blastómeros normales en ambos grupos (clones 79.7% y partenogenéticos 82.1%). La fragmentación en mórulas mostró 3.3% en clones clasificados como «calidad 1» y 14.4% en embriones partenogenéticos «calidad 2» («Buena») (esto es el porcentaje tolerable de fragmentación en un embrión). La viabilidad embrionaria evaluada en mórulas y blastocistos mostró que, a mejor calidad morfológica aumenta la proporción de blastómeros viables, siendo los embriones de calidad 1 y 2 de cada grupo, candidatos a transferencia. La viabilidad del cohorte de embriones clones fue de 53.8% para mórulas y 83.3% para blastocistos (tomando en cuenta ≥75% de blastómeros viables), con diferencias estadísticamente significativas respecto al grupo control (mórulas 80%, blastocistos 84.6%) (P<0.05). Según esta investigación, los criterios internacionales de evaluación morfológica embrionaria de la IETS permitieron describir la dinámica, estadio y calidad de los embriones clones de Ovis canadensis mexicana con alto grado de confiabilidad. Además, de identificar las tasas de anomalías del desarrollo embrionario en los sistemas de cultivo in vitro. Finalmente, se determinó que las mórulas y blastocistos clones de Ovis canadensis mexicana calidad 1 («Excelente») y 2 («Buena»), son candidatos de transferencia embrionaria.; Reproductive biotechnologies allow significant advances in embryo in vitro production, however, efficiencies still have not been observed on in vivo processes. For its success, evaluation and selection of embryos is considered. This consists in identify the best quality embryos that have high odds of generating a pregnancy and a newborn alive. This study was conducted to evaluate bighorn sheep (Ovis canadensis mexicana) cloned embryos from an adult male, by the implementation of the international embryo morphological evaluation criteria. The criteria assessed were: rate of segmentation, where experimental group (O. c. mexicana cloned embryos) results did not differ from those of the control group (Ovis aries parthenogenetic embryos) (P>0.05) and data were similar to that reported in literature. Blastocyst rate was 14.2% for cloned embryos and 19.6% for parthenogenetic embryos (P>0.05). Embryo fragmentation type IV, was higher and significant in the experimental group (P<0.05). The evaluation of embryo development stages proved that embryos that conducted at least one cell division can be identified at 24 hours of culture, making possible to determine the fragmented embryos. At 96 hours culture the highest proportion of morula was detected (clones 33% vs. parthenogenetic 35%). At 192 hours the final embryo development stages observed were: non-segmented, fragmented, blastocysts and blocking development rate. Other evaluated criterion was the embryo morphology which had an inverse relationship with the in vitro culture period, since morphological embryo quality decreased through time. So, it was determined that 96 hours of culture is the best time to predict the final quality of an embryo. Staining in morula showed that quality 1 embryos have the highest percentage of normal blastomeres in both groups (clones 79.7% vs. parthenogenetic 82.1%). Morula fragmentation showed 3.3% clones classified as quality 1 («Excellent») and 14.4% parthenogenetic embryos classified as quality 2 («Good») (this is a tolerable percentage of fragmentation in an embryo). Embryo viability in morula and blastocysts showed that the better morphological quality, the proportion of viable blastomers increases, being quality 1 and 2 embryos candidates for transfer. Viability of the cohort of cloned embryos was 53.8% morula and 83.3% blastocysts (taking into account ≥75% of viable blastomers), with statistically significant differences from the control group (morula 80%, blastocysts 84.6%) (P<0.05). According to this study, the international embryo morphological evaluation criteria of IETS allowed to evaluate dynamics, stage and quality of Ovis canadensis mexicana cloned embryos with a high degree of reliability. They allow identifying rates of abnormal embryo development on in vitro culture systems. Finally, morula and blastocyst cloned embryos from Ovis canadensis mexicana quality 1 («Excellent») and 2 («Good»), are candidates for embryo transfer.