Estudio de la producción y extracción de α-L-fucosidasa de bifidobacterias - Pavón Chimal, Mauricio Eduardo (Universidad Autónoma Metropolitana, 2019)
The fucosylated human milk oligosaccharides are compounds of interest for their prebiotic action in the intestinal microbiota of infants. That is why there is an increase in research associated with the synthesis of oligosaccharides by different techniques. One way of obtaining is enzymatic synthesis by glycosyl hydrolases such as α-L-fucosidase, which is an enzyme found in a wide variety of organisms. Thus, in this work, the objective was to produce and extract α-L-fucosidase from bifidobacteria. For this research, the work is divided into three parts, using three species of bifidobacteria: Bifidobacterium longum, Bifidobacterium longum subsp. infantis and Bifidobacterium bifidum. First, the enzymatic activity of the three bifidobacteria was evaluated, both for the cell associated activity and extracellular activity, finding cell associated activity only. In the second stage, enzyme production was increased by inducing it´s production by using inulin as a sole carbon source in the culture medium, achieving the desired increase in the specific activity of α-L-fucosidase in the three bifidobacteria. Finally, an ultrasound method was performed to perform a partial purification of α-L-fucosidase from Bifidobacterium longum grown in culture medium with inulin, optimizing the extraction using a response surface method with three variables (time, power and volume). Releasing, approximately one third of the cell associated residual activity. With these results it was found that it is possible to increase the activity of α-L-fucosidase and extract and purify the α-Lfucosidase from Bifidobacterium longum.; Los oligosacáridos fucosilados de la leche humana son compuestos de interés por su acción prebiótica en la microbiota intestinal de lactantes. Es por ello que existe un incremento en las investigaciones asociadas a la síntesis de oligosacáridos por diferentes técnicas. Una de las vías de obtención es la síntesis enzimática mediante glicosil-hidrolasas como la α-Lfucosidasa, la cual es una enzima que se encuentra en una amplia variedad de organismos. Es así que en este trabajo, el objetivo fue producir y extraer α-L-fucosidasa de bifidobacterias. Para esta investigación se dividió el trabajo en tres partes, empleando tres especies de bifidobacterias: Bifidobacterium longum, Bifidobacterium longum subsp. infantis y Bifidobacterium bifidum. Primero se evaluó la actividad enzimática de las tres bifidobacterias, tanto para la actividad asociada a la célula como la actividad extracelular, encontrando actividad solamente asociada a la célula. En la segunda etapa se incrementó la producción de enzima induciendo la producción mediante el empleo de inulina como fuente de carbono en el medio de cultivo, logrando el incremento deseado en la actividad específica de α-L-fucosidasa en las tres bifidobacterias. Finalmente se utilizó ultrasonido para realizar una purificación parcial de α-L-fucosidasa de Bifidobacterium longum crecida en medio de cultivo con inulina, optimizando la extracción mediante un método de superficie de respuesta con tres variables (tiempo, potencia y volumen). Es así que se logró extraer aproximadamente un tercio de la actividad residual que estaba asociada a la célula. Con estos resultados se comprobó que es posible aumentar la actividad de la α-L-fucosidasa y extraer y purificar la α-L-fucosidasa proveniente de Bifidobacterium longum.