Estudio de la respuesta en células bronquiales humanas durante la exposición aguda a benzo [ghi]perileno - Torres Flores, Carlos Ulises (Universidad Autónoma Metropolitana, 2018)
El benzo[ghi]perileno (b[ghi]p) es un contaminante atmosférico de la familia de los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP) generados por combustión incompleta de materia orgánica. Este HAP, es producto de actividades antropogénicas como el uso de automóviles, de hecho, es un indicador de combustión incompleta de gasolinas. En el área metropolitana de la Ciudad de México (AMCDMX), se ha reportado que el b[ghi]p, es el contaminante mas abundante en la atmósfera. El presente estudio, se enfoca en los efectos que provoca este HAP sobre la línea celular de epitelio bronquial humano NL20, durante una exposición aguda por 24 horas (h). Con el uso de técnicas como la exclusión de azul de tripano, actividad de la deshidrogenasa láctica (LDH) y por el ensayo de conteo celular (CCK-8), se determinó que el b[ghi]p a la concentración uitilizada no provocó cambios en la viabilidad celular; de la misma manera la actividad de la superóxido dismutasa (SOD) total no fue afectada. Sin embargo, se identificó que las diferencias significativas en la producción de especies reactivas de oxigeno (ERO) ocurre de las 0.5 a las 3 h de exposición al HAP. Por último, los análisis de expresión de genes por RT-qPCR, revelaron que las células NL20 expuestas a b[ghi]p incrementaron significativamente la expresión de las citocinas proinflamatorias interleucina (IL)-6, interleucina (IL)-8 y el factor de necrosis tumoral (TNF)-b. Los resultados sugieren que las citocinas proinflamatorias podrían ser inducidas por la activación del receptor aril hidrocarburo (AHR), además, por una vía paralela, que se relaciona con la presencia de ERO, ya que cuando las células fueron expuestas a b[ghi]p mas un antagonista del AHR (CH223191) o Nacetilcisteína (NAC), el resultado de inducción de genes fue considerabablemente disminuido a niveles basales.; Benzo[ghi]perylene (b[ghi]p) is an atmospheric pollutant that belongs to the family of the polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), which are generated from incomplete combustion of organic matter. This PAH is produced by anthropogenic activities like transporting in diesel or gasoline based vehicles. In fact, b[ghi]p levels are used as indicator of incomplete combustion of gasoline and only in the metropolitan area of Mexico´s city, this atmospheric pollutant is the most abundant. Therefore, the effects produced on bronchial cells due to exposure to b[ghi]p need to be studied. In this research project, we evaluated some possible effects produced by the acute exposure (24 hours) of the bronchial cell line, NL-20, to b[ghi]p. By using the viability assays: trypan blue exclusion, release of lactate dehydrogenase (LDH) and cell counting kit -8 (CCK-8), we found no changes on cell viability after the exposure to b[ghi]p. Furthermore, cells exposed to b[ghi]p did not display changes on superoxide dismutase (SOD) activity at the end of the acute exposure. Nevertheless, greater production of reactive oxygen species (ROS) was identified as early as 0.5 to 3 hours after exposure. Finally, evaluation of gene expression analysis with the TaqMan™ Array, Human Cytokine Network and by RT-qPCR using SYBER green Master Mix, showed an increase in the expression levels of the proinflammatory cytokines: IL-6, IL-8, TNF-b, after exposure to b[ghi]p. In recovery assays aiming to antagonize the AHR pathway(with CH223191) and ROS levels (with N-acetylcysteine), the increased expression of proinflammatory cytokines is returned to basal levels. All together these data suggest that exposure to b[ghi]p has two steps inflammatory effect on the bronchial cells. First, an early proinflammatory effect induced by an unknown ROS-production related pathway, and a second proinflammtory effect produced by the AHR.