Sobre-expresión heteróloga de un péptido antimicrobiano en Streptomyces lividans TK24 - Roldán Tapia, Marisol (Universidad Autónoma Metropolitana, 2017)
Los péptidos con actividad antimicrobiana (AMPs), son de bajo peso molecular y codificados en el genoma de animales y plantas. Típicamente, son catiónicos, anfipáticos, lo que les confiere estabilidad. (Boman, 1996). Se sintetizan en tejidos como la piel, intestino y pulmones (Rao, 1995), más rápido que una inmunoglobulina y a menor costo metabólico. Pueden estar disponibles para actuar inmediatamente y se liberan o producen cuando las células se estimulan por contacto con microorganismos (Nissen-Meyer y Nes, 1997; Rao, 1995). Son un medio rápido para combatir una amplia variedad de bacterias, hongos, virus e incluso protozoarios (Evans y Harmon, 1995). Debido a su mecanismo de acción, no afectan a las células eucarióticas; por ello se están estudiando intensamente. En la actualidad son usados como agentes antimicrobianos y como agentes terapéuticos (Boman, 1996), En este trabajo, se desarrollaron tres estrategias moleculares con la finalidad de producir de manera eficiente un péptido catiónico con actividad antimicrobiana (CAP). La primera consistió en el uso de un sistema para Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS, en donde el gen de interés se mantiene silenciado hasta que se administra un inductor (evitando así la toxicidad por expresión basal). En la segunda se modeló una secuencia complementaria al péptido de interés, con el fin de atenuar la toxicidad de este sobre la célula huésped. En la tercera se diseñó un casette de expresión para Streptomyces lividans TK24, en el que se utilizó el promotor y el péptido señal de Streptomyces venezuelae, sistema que permitió la sobre-expresión y secreción de un péptido catiónico al medio de cultivo, facilitando su recuperación y la disminución de toxicidad sobre el organismo productor. Los resultados obtenidos muestran la eficiencia del sistema, se logró una concentración de 11.61 mg/ml de péptido, lo que representa un incremento de por lo menos diez veces con respecto a otras estrategias reportadas previamente (Parachin y col., 2012). Resume Este sistema, consta de la construcción de un cassette de expresión, con elementos que permiten incrementar la eficiencia en la producción del péptido, tales como el promotor y el péptido señal de Streptomyces venezuelae. El péptido expresado mostró actividad contra diversos fitopatógenos, como: Colletotrichum sp, Fusarium oxysporum, Fusarium solani Bacillus subtilis, Xanthomonas campestris, Pseudomona aurofaciens, Nigrospora oryzae, Pseudomonas syringae pv. tomato Ralstonia solanacearum y Xanthomonas axonopodis pv. Citri. Por otro lado, se sentaron las bases para realizar la expresión del péptido modificado hipotéticamente inactivo en Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS.