El uso de la genotoxicocinética y al citotoxicocinética para caracterizar la acción de radiosensibilizadores - Cruz Vallejo, Virginia Leticia (Universidad Autónoma Metropolitana, 2019)
The aim of this study was to determine the effect of low doses of bromodeoxyuridine (BrdU) (0.125 mg/g) or cisplatin (cis-Pt) (1.0 µmol/Kg), on radiosensitization at low doses of radiation (0.5 Gy) and characterize its form of action in bone marrow cells of mice in vivo. This by using single cell gel electrophoresis (SCGE), and the kinetics of micronucleated reticulocytes induction (RET-MN) and of the reduction of reticulocytes (RET) determined by flow cytometry. In the case of BrdU, the effect proved by SCGE, indicated that low levels of BrdU incorporation into the DNA, increase the sensitivity to gamma radiation; particularly during DNA synthesis. The kinetics of induction of RET-MN induction, in peripheral blood samples along 72 h, indicated that gamma radiation causes two main peaks of induction of MN in animals treated or not with BrdU. In those not treated with BrdU, the first peak was not associated with cytotoxicity, but in those treated with BrdU cytotoxicity this was associated. In the cells substituted with BrdU prior to irradiation the second peak showed, an increase in the induction of MN associated with an increase in cytotoxicity. The pretreatment with BrdU seems to favour a radioinduced kind of lesion or an increase number of lesions difficult to repair, possibly cross-links as previously described. In the case of the cis-Pt first, the timing of damage was determined in peripheral blood leukocytes by SCGE, the results indicated that at 40 minutes occurred the maximum induction of breaks in the DNA. With this data, the analysis of the kinetics induction of RET-MN was performed, by administering cis-Pt 40 minutes before irradiation. The pretreatment with a low dose of cis-Pt, increased sensitivity to low dose of radiation and evidenced three mechanisms of induction of MN, two of them being, the main ones, attributable to failures in the excision and recombination repair, respectivel respectively, both effects were associated with an increase in cytotoxicity.; El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de dosis bajas de bromodesoxiuridina (BrdU) (0.125 mg/g) y cisplatino (cis-Pt) (1.0 µmol/Kg), sobre la radiosensibilización a dosis bajas de radiación (0.5 Gy) y caracterizar su forma de acción en células de la médula ósea en ratones in vivo. En ambos casos se utilizó la electroforesis unicelular en gel (EUG) y se determinaron las cinéticas de formación de reticulocitos micronucleados (RET-MN) y de reducción de reticulocitos (RET) mediante citometría de flujo. En el caso de la determinación del efecto radiosensibilizador de la BrdU, se probó el efecto mediante la EUG; los resultados indicaron que niveles bajos de incorporación de BrdU en el ADN incrementan la sensibilidad a la radiación gamma; particularmente durante la síntesis del ADN. Para el análisis de la cinética de inducción de RET-MN, se tomaron muestras de sangre periférica de los ratones antes (testigo) y después de cada tratamiento (cada 8 h hasta completar 72 h). Se estableció el tiempo y el número de picos de inducción de RET-MN, mismos que indican el número de mecanismos de genotoxicidad producidos con los tratamientos; así como la correlación entre genotoxicidad y citotoxicidad. La radiación gamma causa dos picos principales de inducción de MN en los animales tratados o no con BrdU. En los no tratados con BrdU, el primer pico no se asoció a citotoxicidad, pero si en los tratados con BrdU. En las células irradiadas y substituidas con BrdU, en el segundo pico se observó un incrementó en la inducción de MN y de citotoxicidad. El pretratamiento con BrdU parece favorecer una lesión radioinducida o el incremento en el número de lesiones difíciles de reparar; lo cual posiblemente sea debido a la formación de enlaces cruzados como se ha descrito. En el caso de la determinación del efecto radiosensibilizador del cis-Pt; primero se determinó en leucocitos de sangre periférica mediante EUG, que a los 40 minutos se observó la máxima inducción de rupturas en el ADN. Con éste dato se hizo el análisis de la cinética de inducción de RET-MN; el cis-Pt se administró 40 minutos antes de la irradiación y se siguió el mismo procedimiento de determinación de la frecuencia de RET-MN que en el estudio con BrdU. El pretratamiento con bajas dosis de cisPt, incrementó la sensibilidad a bajas dosis de radiación y evidenció tres mecanismos de inducción de MN, siendo dos de ellos los principales, atribuibles a las fallas en la reparación por escisión y por recombinación, ambos efectos estuvieron asociados con un incremento en la citotoxicidad.