Caracterización de lacasas producidas por un hongo termofílico silvestre aislado a partir de desechos lignocelulósicos - Medina Rivero, Emilio (Universidad Autónoma Metropolitana, 2003)
Los hongos termofílicos en la actualidad son de gran importancia debido a que por lo general producen enzimas con propiedades interesantes como son la termoestabilidad y la resistencia a disolventes orgánicos. Estas enzimas tienen un gran potencial biotecnológico. Por ejemplo: en las industrias del papel para el bioblanqueo de la pulpa, que se lleva a cabo a altas temperaturas, y en la síntesis orgánica industrial que se lleva a cabo en sistemas de reacción no acuosos. Por tal motivo, en este trabajo se aisló una cepa de hongo termofílico ligninolítico (cepa EUM1) en el trópico mexicano. De esta cepa se obtuvieron lacasas a partir de un medio de cereal Bran Flakes al 3 % a 40ºC. En este medio se obtuvieron 650 U/L de lacasas, que representó 35 veces más actividad cuando se comparó con el medio de extracto de malta al 2 %. Posteriormente, las lacasas del extracto se purificaron parcialmente con sulfato de amonio, intercambio aniónico (Q sepharosa), ultrafiltración y filtración en gel (10 a 200 KDa), para obtener un grado de purificación de 19.8 veces. El zimograma del extracto purificado reveló que se trataba de dos isoenzimas, con características moleculares muy parecidas, con un pIap de aproximadamente 4, peso molecular aparente de 77.37 KDa estimado por electroforesis con SDS. Las condiciones óptimas de actividad catalítica fueron pH 4 y temperatura de 60°C. Lo relevante de la caracterización fue que las dos isoenzimas fueron estables durante una hora en un amplio rango de pH entre 4-10 y a la temperatura de 50 y 60°C, conservando aproximadamente el 100 % de su actividad. Se determinaron las constantes cinéticas aparentes, debido a que esta preparación contenía ambas isoformas. De manera que su kcatap con ABTS como sustrato fue de 3402 min-1, 8 veces mayor comparada con la lacasa recombinante producida industrialmente por Novo Nordisk a partir de Aspergillus oryzae. Esta preparación conservó durante 5 minutos el 80 y 65 % de su actividad con 20 % de etanol y acetonitrilo, respectivamente. Y mantuvo el 52 y 30 % de actividad en etanol y acetonitrilo al 10 % durante una hora. Estos resultados abren la posibilidad de probar as isoenzimas lacasas (lacasa 2) con sustratos de interés industrial solubles en medios semiacuosos y en procesos que se realicen a temperaturas elevadas.