Estudio molecular de las distrofias musculares tipo duchenne y tipo Becker y detención de portadoras - Gutiérrez Reyes, Esperanza Gabriela (Universidad Autónoma Metropolitana, 1996)
Las distrofias musculares tipo Duchenne (DMD) y tipo Becker (Dm), son desordenes degenerativos del músculo esquelético, que se heredan de forma recesiva ligada al X Se caracterizan por debilidad muscular progresiva, pseudohipertrofia de los gemelos y elevación de la creatininfosfocinasa (CPK). La DMD se presenta con una incidencia de 1 en 3,500 varones nacidos vivos, mientras que la DMB afecta a 1 en 30,000. Ambos padecimientos son ocasionados por mutaciones en' el gen DMD, que se encuentra en el brazo corto del cromosoma X, en la banda Xp2 l. El gen consta de 79 exones y 2400 kb, siendo este el más grande de los descritos hasta el momento. El producto del gen es una proteína de 427 kDa denominada distrofina que forma parte del citoesqueleto, se localiza en la cara interna del sarcolema del músculo. Sus niveles más altos se encuentran en el músculo esquelético y cardíaco. Varios autores han propuesto que las mutaciones que ocasiona DMD conducen a la falta de síntesis de la distrofina, mientras que en la DMB se genera una proteína con fknción residual En el gen de la distrofina, las deleciones se han localizado con mayor frecuencia en el extremo 5' y en el dominio que comprende los exones 44-55 En la presente tesis se propusó: 1) Caracterizar las deleciones que afectan al gen DMD en pacientes diagnósticados clínicamente con DMD y DMB; 2) Determinar la frecuencia de las deleciones y su localización; 3) Detectar a las portadoras en las familias informativas; 4) Establecer si existe correlación entre el genotipo encontrado y el fenotipo del paciente La población objetivo esta constituida 56 pacientes con DMD, 5 pacientes con DMB y sus familiares de primer grado. La extracción del DNA se realizo por el método de fenol-cloroformo. Se cuantificó en un espectofotómetro con luz UV, la integridad se corroboró en un gel de agarosa al 0.8% . Para el análisis de las deleciones se empleo la ténica de PCR-M; se utilizaron 19 pares de iniciadores las cuales se dividieron en cuatro grupos de acuerdo al tamafio de los productos de la amplificación. Para la detección de portadoras se empleo el estudio de haplotipos detectando los polimorfismos intragénicos para las enzimas TaqI y XmnI (RFLPs). Se difhió la fiecuencia de los haplotipos pERT87.15-XmnI y pERT87.8-TaqI presentes en la población y se estableció la estrategia para la detección de portadoras. El 54.1% de los pacientes presentó deleción en uno o varios exones, encontrandose una mayor frecuencia en la región central del gen que comprende del exón 44-55. De la eliminaciones encontradas en pacientes con DMD en el 80% de los casos ocasionó cambio del marco de lectura. El análisis de los polimorfismos se encontró que en el 54.1% de las madres fue heterocigota para alguno de los poliorfismos. El análisis de los haplotipos mostró que el 75.4% de la población fue informativa para la detección de portadoras. De nuestro esultados concluimos que la estrategia utilizada pennite la caracterización y el mapeo de las deleciones del gen y por otra parte la combinación del análisis de los RFLPs estudiados, tienen un alto potencial en la detección de portadoras. fenotipo del paciente. La población objetivo esta constituida 56 pacientes con DMD, S pacientes con DMB y sus familiares de primer grado La extracción del DNA se realizo por el método de fenol-cloroformo. Se cuantificó en un espectofotómetro con luz UV, la integridad se corroboró en un gel de agarosa al 0.8% . Para el análisis de las deleciones se empleo la ténica de PCR-M; se utilizaron 19 pares de iniciadores las cuales se dividieron en cuatro grupos de acuerdo al tamafio de los productos de la amplificación. Para la detección de portadoras se empleo el estudio de haplotipos detectando los polimorfismos intragénicos para las &as TaqI y XmnI (RFLPs). Se difinió la frecuencia de los haplotipos pERT87.15-XmnI y pERT87.8-TaqI presentes en la población y se estableció la estrategia para la detección de portadoras. El 54.1% de los pacientes presentó deleción en uno o varios exones, encontrandose una mayor frecuencia en la región central del gen que comprende del exón 44-55. De la eliminaciones encontradas en pacientes con DMD en el 80% de los casos ocasionó cambio del marco de lectura. El análisis de los polimorfismos se encontró que en el 54.1% de las madres fue heterocigota para alguno de los polimorfismos El análisis de los haplotipos mostró que el 75.4% de la población fue informativa para la detección de portadoras. De nuestro esultados concluimos que la estrategia utilizada permite la caracterización y el mapeo de las deleciones del gen y por otra parte la combinación del análisis de los RFLPs estudiados, tienen un alto potencial en la detección de portadoras.