Aislamiento de un péptido de Trypanosoma cruzi (Sarcomastigophora: Kinetoplastida) obtenido por cDNA y su uso en el diagnóstico de la enfermedad de chagas - Campos Valdéz, Guillermina (Universidad Autónoma Metropolitana, 2003)
Trypanosoma cruzi es el agente etiológico de la enfermedad de Chagas, es transmitido a través del contacto con la materia fecal de un triatomino infectado. El diagnóstico de esta parasitosis se realiza mediante la detección de anticuerpos específicos en suero, sin embargo, existen reacciones falsas positivas o reacciones cruzadas con Leishmania y T. rangeli. El uso de la tecnología de DNA recombinante para la síntesis de péptidos a provocado que la sensibilidad y la especificidad de las pruebas diagnósticas se vea beneficiada. Por tal razón, el objetivo del trabajo fue identificar péptidos de T. cruzi de un aislado mexicano, por medio de la construcción de una genoteca de expresión de cDNA, que puedan ser usados para la identificación de anticuerpos presentes en el suero de pacientes chagásicos mexicanos. Se sintetizó cDNA con un método que permite trabajar con pocas células a partir de 300 epimastigotes de T. cruzi aislados de un vector proveniente del estado de Campeche y cultivados in vivo en medio LIT. Se utilizaron dos sistemas de clonación: ZAP Express II y TOPO TA. La presencia de clonas recombinantes que expresan un péptido con características antigénicas se determinó por Inmunotransferencia y Western blot, utilizando como anticuerpo primario sueros humanos positivos a la enfermedad de Chagas. Las clonas identificadas fueron secuenciadas por métodos automatizados y su análisis se realizó por la comparación con el banco de secuencias del Centro Nacional de Información Bioquímica (NIH, EUA). De los resultados de secuenciación se obtuvieron las clonas Tc1C y Tc2C con el sistema ZAP Express II y las clonas M13Tc1 y M13Tc2 con el sistema TOPO TA. La secuencia Tc1C no presentó similitud con las secuencias presentes en la base de datos, lo que sugiere que se trata de una secuencia nueva. La clona Tc2 presentó homología con una secuencia de RNA ribosomal 5S de Homo sapiens, con un valor de identidad del 99% (509/513), probabilidad de error de 0% y Gaps 0% (2/513). La secuencia de M13Tc1 mostró homología con la secuencia completa de un gen del RNA ribosomal 18S de T. cruzi, con un valor de identidad del 99% (387/389), probabilidad de error de 0% y Gaps 0% (2/389). La clona M13Tc2 presentó homología con pequeñas zonas del cromosoma 17 de humano, sin encontrar similitud estadísticamente significativa. La importancia de haber identificado una proteína nueva radica en la aportación de un nuevo antígeno capaz de identificar anticuerpos presentes en el suero de individuos infectados con T.cruzi en etapas tempranas y tardías, con mayor sensibilidad y especificidad, evitando las reacciones cruzadas. Este péptido puede tener aplicación diagnóstica implementando un método mas certero y confiable; así como identificar la importancia que tiene este péptido en las funciones vitales del parásito para utilizarlo como medida de control de T.cruzi. La identificación de RNA ribosomal mediante el uso de antisueros se ha reportado en clonas que expresan secuencias de RNA ribosomal de Leishmania que son reconocidas por sueros de Leishmaniosos. No hay una explicación definitiva, pero existen antecedentes de enfermedades auto-inmunes en las que se ha descrito la existencia de anticuerpos frente a ciertos motivos de RNA ribosomal.