Reprogramación de carioplastos con extractos de ovocitos como estrategia de producción de embriones por handmade cloning en ovis aries - Vazquez Avendaño, José Roberto (Universidad Autónoma Metropolitana, 2016)
The Oocyte have the inherent ability to reprogram the sperm nucleus to form an embryo, which result in a new organism; nevertheless, also it has the ability to reprogram the nucleus of differentiated somatic cell, as it has been shown in Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT). Cytoplasmic extracts of Germinal Vesicle oocytes (VG) and Metaphase II (MII) oocytes have been used for reprogramming of cumulus cells or fibroblasts, they used as karyoplasts for production cloning embryos of mammalian, improving the growth rate and embryos quality. In this study, the effect fibroblast of Ovis aries exposure to homologues MII oocytes extracts, used as karioplasts for in vitro production of embryos by handmade cloning, The stages reached of embryos development was 3 to 8, 10 to 12 cells and morula. No significant difference (P>0.05) between groups with respect to the embryos development stage; however, to analyze the relationship between the number of nucleus and the number of blastomere of embryos, which showed cytoplasmic fragmentation; It was observed that cloned embryos from fibroblasts treated with MII oocytes extracts (0.58) showed better ratio compared to those untreated (0.45) and partenogenetic. Exposure of fibroblasts to extracts MII oocytes, improved communication between the nucleus and cytoplasm from cloning embryos of Ovis aries; which was reflected in a higher proportion of blastomeres with nucleus in the fragmentation embryos. It is noteworthy that depending on the magnitude of cytoplasmic fragmentation may or may not compromise the viability of the embryo development.; El ovocito tienen la capacidad inherente de reprogramar el núcleo espermático para generar un embrión, que finalmente originará un nuevo organismo; no obstante, también tiene la capacidad de reprogramar el núcleo de una célula somática diferenciada, como se ha demostrado en la transferencia nuclear de células somáticas (SCNT, de sus siglas en inglés). Se han utilizado extractos de ovocitos en vesícula germinal (VG) o metafase II (MII) para la reprogramación de células del cumulo o fibroblastos, utilizadas como carioplastos para la producción de embriones clonados de mamíferos, mejorando su tasa de desarrollo y calidad. En este estudio se analizó el efecto de la exposición de fibroblastos de Ovis aries a extractos de ovocitos en MII homólogos, utilizados como carioplastos para la producción in vitro de embriones por clonación manual. Las etapas de desarrollo embrionario alcanzadas fueron de 3 a 8, 10 a 12 células y mórulas. No hubo diferencia significativa (P>0.05) entre los grupos con respecto a la etapa de desarrollo embrionario; Sin embargo, al analizar la relación entre el número de núcleos y el número de blastómeros de los embriones, que presentaron fragmentación del citoplasma; se observó que los embriones clonados a partir de fibroblastos tratados con extractos de ovocitos en MII (0.58) mostraron una mejor relación en comparación con aquellos no tratados (0.45) y partenogénicos (0.38). La exposición de los fibroblastos a extractos de ovocitos en MII, mejoró la comunicación entre el núcleo y el citoplasma de los embriones clonados de Ovis aries; lo cual se reflejó en una mayor proporción de blastómeros con núcleos en los embriones fragmentados. Es importante mencionar que dependiendo de la magnitud de la fragmentación citoplasmática, puede o no comprometer la viabilidad del embrión en formación.